Detección molecular del virus de la fiebre amarilla en muestras de suero de casos fatales humanos y en cerebros de ratón / Molecular detection of yellow fever virus in human sera and mice brains

Hemos adaptado un método molecular basado en la técnica de transcripción reversa seguida de la reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR) para diagnóstico alternativo de la infección por el virus de la fiebre amarilla. Se tomaron tres sueros liofilizados de casos fatales de fiebre amarilla y cuatro sueros frescos, de los cuales tres pertenecían a casos fatales de la enfermedad y el cuarto a un paciente sintomático con serología IgM positiva para fiebre amarilla; los sueros fueron tratados con Trizol-LS( para extraer el ARN viral que fue sometido a reacción de RT y posteriormente a PCR, para la cual se diseñaron dos parejas de iniciadores específicos de fiebre amarilla: iniciadores directos (sentido) JM2104 (5ï-CGTTGGGAGAGGAGATTC-3ï) y JM2249 (5ï-TTCTTCACTTCGGTTGGG-3ï), e iniciadores inversos (antisentido) JM2673 (5ï-TCATCTGCCCTGCTTCTC-3ï) y JM2751 (5ï-CCTCTCTGGTAAACATTCT-3ï). La aplicación de la técnica en tejidos se hizo en cerebros de ratón infectados con el virus amarílico, tratados con una solución de lisis antes de purificar el ARN. En geles de agarosa se observaron bandas únicas de amplificación del tamaño esperado (569 pb y 502 pb); todas las muestras fueron corroboradas con las dos parejas de iniciadores y en dos de las muestras de suero fresco los resultados positivos para fiebre amarilla fueron comprobados con estudio histopatológico. Este método de detección molecular permitió demostrar de manera r pida y eficiente la presencia del virus de la fiebre amarilla, hecho que tiene importantes implicaciones diagnósticas para este problema de salud pública.

Demostracion del virus de la encefalitis equina venezolana tipo enzootico en la hemolinfa de mosquitos Psorophora confinnis infectados por via oral / Demonstration of Venezuelan equine encephalitis virus: enzootic type in the haemolymph of the Psorophora confinnis mosquitoes infected by mouth

Se llevo a cabo un experimento con el proposito de determinar si en mosquitos Psorophora confinnis (Arribalzaga, 1.891) infectados por via oral con una cepa exootica de Encefalitis Equina Venezolana era posible detectar el virus en la hemolinfa de estos mosquitos. El virus se pudo demostrar en la hemolinfa a las 24 horas post-infeccion en el 66.6% de los mosquitos, en el 75% de los mosquitos a los 2 y 9 dias post-infeccion y en el 100% de los mosquitos a los 6, 7, 8, 10, 11, 12 y 13 dia post-infeccion. Todos los mosquitos en los cuales se demostro virus en la hemolinfa fueron probados para intento de aislamiento de virus en el mosquito total y hubo una perfecta correlacion entre las dos. Los mosquitos que fueron negativos para virus en la hemolinfa tambien lo fueron cuando se probaron como mosquito total. En algunas hembras tomadas al azar se hizo una comparacion de los titulos del virus en la hemolinfa y en el mosquito total y no se encontro una diferencia significativa